00.复习清单15

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• DNA 会发生复制、转录、翻译，这句话并没有什么毛病。
• 生长素能促进扦插枝条生根，但是不会促进发芽；还能促进果实发育。

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• 植物组织培养技术：就是在无菌和人工控制条件下将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。
• 脱分化和再分化：离体的植物组织或细胞，在培养了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植物体。
  • 由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化
  • 脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化
• 由番茄韧皮部细胞形成幼苗 A 的过程需要经过脱分化和再分化两个关键步骤，该过程用到植物组织培养技术。
• 植物顶端分生区附近（如茎尖）的病毒极少，甚至无病毒，因此为了获得脱毒苗，可选取茎尖进行培养
• 植物细胞壁的化学成分主要是纤维素和果胶，可用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得具有活力的原生质体。
• 植物细胞杂交，所以依据的原理是细胞膜具有一定的流动性和植物细胞的全能性。
• 不能表现地上长番茄，地下长马铃薯，原因是杂种植株的细胞中含有两个物种的遗传物质，由于相互干扰，使双方基因都不能有序正常的表达。

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• 细胞膜具有的结构特点是：一定的流动性。
  • 因为细胞膜由磷脂双分子层和镶嵌的蛋白质构成，磷脂分子和蛋白质可以运动。
• 细胞膜具有的功能特点：选择透过性。
  • 因为膜上蛋白质种类、数量不同，磷脂双分子层具有的疏水性

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• 愈伤组织细胞内没有叶绿体，所以不能进行光合作用，其培养基中需要糖类、氨基酸等有机营养
• 诱导原生质体 A 和 B 融合的物理方法有离心或电刺激等，化学方法用聚乙二醇 (PEG) 来诱导，而灭活的病毒适合诱导动物细胞的融合

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• 植物体细胞杂交技术中，原生质体融合后，应该是先促进生芽，再促进生根。
  • 理解：生芽后的植株可通过光合作用自养，为根的生长提供养分；芽作为植物幼嫩组织可产生促进生根的生长素，并且生长素 只能按“极性运输”的方向（即 由形态学上端运输到形态学下端，如图2所示）进行运输，这样便可以 促进外植体的形态学下端快速生根，从而确保试管 苗的顺利形成

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• 植物 体细胞 杂交融合时，可能会发生染色体数目的缺失。
• 如果杂种细胞有 2 个染色体组，但却没有同源染色体，那么是不可育的。
  • 比如骡子的染色体组由马和驴各自的染色体组成，通常有63条染色体，其中只有31对能够正常配对，剩下的1条来自马的染色体找不到同源染色体。这导致骡子在减数分裂时无法正常进行配对，从而造成不育。

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• 植物细胞用纤维素酶和果胶酶处理以获得原生质体时，应该使用等渗溶液或者略高渗溶液
  • 最好使用略高渗溶液，以便发生微小的质壁分离又不使细胞死亡，而且扩大了酶与细胞壁的接触面积
• 在形成配子时，细胞质基因是随机分配的；所以细胞质基因的性状不能稳定遗传

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• 动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同，动物细胞培养采用的是液体培养基、植物组织培养采用的是固体培养基
• 动物细胞培养需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，但植物组织培养过程不需要胰蛋白酶处理
• 动物细胞培养可以用于检测有毒物质（根据变异细胞占全部培养细胞的比例来判断该物质的毒性），茎尖（几乎不含病毒）培养可用于植物脱除病毒

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• 在利用肝组织块制备肝细胞悬液时，常用胰蛋白酶，不能使用胃蛋白酶，因为胃蛋白酶需要在强酸环境下才能起作用，但这样的环境不适于细胞生存
• 细胞培养应在含 CO₂恒温培养箱中进行，CO₂的作用是维持培养液的 pH 值
• 动物细胞培养过程中会出现接触抑制现象

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• 恶性肿瘤细胞系能无限繁殖，细胞表面糖蛋白减少，细胞之间的黏着性降低，即具有不死性（能无限增值）和失去接触抑制等特性
• 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础
• 细胞株传到 50 左右不能再继续传代，部分细胞遗传物质改变，具有癌变细胞的特点，可以在培养条件下无限制的传代下去

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• 单克隆抗体的制备
  • （1）制备产生特异性抗体的 B 淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的 B 淋巴细胞。
  • （2）获得杂交瘤细胞
    • ①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的 B 淋巴细胞融合；
    • ②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，这些杂种细胞既能够增殖又能产生抗体（不止一种）。
  • （3）克隆化培养和抗体检测（将稀释后的杂种细胞滴入玻璃板中，每个孔中一个）
  • （4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖
  • （5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取
• 多孔玻璃板中的细胞有三种融合细胞，即 B 淋巴细胞和鼠瘤细胞的融合细胞、B 淋巴细胞和 B 淋巴细胞的融合细胞、鼠瘤细胞和鼠瘤细胞的融合细胞
• 经过筛选的杂交瘤细胞，所以既能大量繁殖，又能产生抗体

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• 只有骨髓瘤细胞和 B 淋巴细胞融合才能大量增殖和产生特异性抗体
• 筛选 1 需要用选择培养基才能获得杂交瘤细胞

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• 灭火病毒培养法 用于且只能用于诱导动物细胞融合。除此之外适用于诱导动植物细胞融合的方法有 PEG 融合法、电融合法。

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• 在培养细胞时需在培养基中加入一定量的动物血清的作用是模拟内环境和补充未知的缺少的营养物质，激发成纤维细胞核的全能性的是卵细胞的细胞质中的物质
• 发情处理，是为了让胚胎移入受体提供相同的生理环境

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• 选用去核卵（母）细胞的原因：卵（母）细胞比较大，容易操作；卵（母）细胞细胞质多，营养丰富。卵细胞的细胞质可使体细胞细胞核全能性得到表达。
• 体细胞核移植的大致过程是：将供体细胞核导入受体去核卵母细胞，形成重组细胞，用电脉冲刺激形成早期胚胎，导入代孕母羊的子宫，妊娠、出生后即克隆动物。
• 若 a 是动物体细胞核移植技术，将体细胞核移入去核卵母细胞，得到重构胚，发育得到的①为克隆动物，该技术可体现动物细胞核全能性
• 若 b 是体外受精技术，体外模拟体内受精，②的产生属于有性生殖，该技术可实现良种家畜大量繁殖
• 若 c 是胚胎分割技术，胚胎中细胞都是有丝分裂形成的，③中来自同一胚胎的子代具有相同的遗传物质，属于无性繁殖
• ①②③中的受体（代孕母体）均需激素处理，以达到同期发情的目的

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• 动物细胞核移植：将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为克隆动物。动物细胞核移植技术的原理是动物细胞核具有全能性。

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